Транслокація SS18 (FISH)
Транслокація SS18 (FISH) — це молекулярно-цитогенетичне дослідження методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), призначене для виявлення структурних перебудов (розривів/транслокацій) гена SS18, розташованого у локусі 18q11.2 (раніше відомого як SYT) у тканині пухлини.
Специфічна реципрокна транслокація t(X;18)(p11.2;q11.2) призводить до злиття гена SS18 із генами родини SSX (SSX1, SSX2 або рідше SSX4). Утворений химерний онкобілок SS18-SSX порушує функціонування хроматин-ремоделювального комплексу SWI/SNF, що спричинює неконтрольовану проліферацію клітин. Ця аберація виявляється більш ніж у 95% випадків синовіальної саркоми (як монофазного, так і біфазного або низькодиференційованого типів), завдяки чому дослідження методом FISH є патогномонічним підтверджувальним тестом.
Клінічні показання до проведення дослідження
Молекулярно-цитогенетичний аналіз транслокації гена SS18 призначається онкологом, дитячим онкологом або патоморфологом у таких випадках:
- Верифікація та підтвердження патоморфологічного діагнозу синовіальної саркоми незалежно від анатомічної локалізації (кінцівки, тулуб, голова та шия, черево або грудна порожнина).
- Диференціальна діагностика складних мезенхімальних пухлин, що мають схожу морфологічну структуру (веретеноподібноклітинних, круглоклітинних та епітеліоїдних сарком м'яких тканин).
- Проведення діагностики у складних або неоднозначних випадках, коли імуногістохімічне дослідження надає сумнівні або неостаточні результати (наприклад, атиповий фокальний імунофенотип TLE1, cytokeratin, EMA).
- Нозологічна класифікація мезенхімальних пухлин неясного генезу згідно з рекомендаціями ВООЗ (WHO).
Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Зафіксована у формаліні та залита в парафін тканина пухлини (FFPE-блок), отримана під час біопсії (трепан-біопсія) або хірургічної резекції новоутворення. |
| Обов’язковий супровід | Разом із блоком обов'язково надається 1 контрольне гістологічне скло (H&E) або замовляється його виготовлення для картування пухлинних осередків. |
| Вимоги до тканини | Оптимальний вміст пухлинних клітин у зрізі — 50-100 шт. Необхідно уникати матеріал з ділянок вираженого некрозу або гіалінозу. |
| Транспортування | Доставка здійснюється при кімнатній температурі (+15…+25 °C) у захисному контейнері. Уникати нагрівання вище +30 °C (призводить до плавлення парафіну). Контейнер має бути щільно закритий та чітко маркований (ПІБ пацієнта, дата народження, анатомічний тип матеріалу). |
Критерії відбракування зразка
Зразок матеріалу може бути відхилено або оцінено як неінформативний через:
- недостатню кількість якісних пухлинних клітин у наданому зрізі (50–100 шт.);
- порушення правил первинної фіксації тканини (фіксація некоригованим формаліном, надмірно тривала фіксація понад 48–72 години або гіпофіксація), що призводить до руйнування ДНК та високого рівня автофлуоресценції;
- проведення жорсткої декальцинації кісткових біоптатів із застосуванням концентрованих кислот (рекомендується використовувати м'які декальцинуючі розчини на основі ЕДТА);
- відсутність маркування на блоці або розбіжності з даними у направленні.
Клінічні обмеження
Метод FISH із Break-Apart-зондом встановлює факт розриву хромосомного локусу гена SS18 (18q11.2), проте не визначає конкретний ген-партнер злиття (SSX1, SSX2 або SSX4). Оскільки переважна більшість транслокацій залучає саме гени родини SSX, для підтвердження діагнозу синовіальної саркоми визначення конкретного підтипу SSX зазвичай не є обов'язковим, хоча може мати певне прогностичне значення.
Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтесь послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для Вашого клінічного випадку. |
| 2 | Оформлення замовлення У бланку зазначаються попередній патоморфологічний діагноз, локалізація пухлини та дані ІГХ-дослідження (за наявності). |
| 3 | Отримання біоматеріалу Пацієнт або його представник отримує заархівований парафіновий блок (FFPE) та контрольне скло (H&E) у патологоанатомічному відділенні за місцем проведення біопсії чи операції. |
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер із парафіновим блоком, склом та заповненим направленням (із копією первинного патоморфологічного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або надсилається спеціалізованою логістичною службою. |
Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус гена: транслокація гена SS18 виявлена або не виявлена, а також наводиться кількість аберантних ядер серед проаналізованих клітин.
Отримані цитогенетичні дані інтерпретуються лікарем у комплексі з морфологією.
Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) на парафінових зрізах із використанням специфічних ДНК-зондів типу Break-Apart (двоколірних зондів для визначення розриву гена SS18 у локусі 18q11.2). |
| Аналітична процедура | Включає депарафінізацію зрізів, ферментативну протеолізну обробку, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
| Попередній контроль | Обов'язкове картування пухлинної зони лікарем-патоморфологом на склі H&E перед гібридизацією. |
| Критерії оцінки | Зразок вважається позитивним щодо транслокації, якщо відсоток ядер із розщепленими сигналами перевищує встановлений аналітичний поріг (зазвичай >10% від загальної кількості підрахованих ядер). |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: оцінка збереження морфології ядер та відсутності значних інгібуючих артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: оцінка сигналів у непухлинних клітинах строми/судин (нормальний злитий сигнал слугує контролем ефективності гібридизації).
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
Суміжні тести та пакети
Для лікаря: корисні ресурси
- WHO Classification of Tumours: Soft Tissue and Bone Tumours — класифікація ВООЗ, де виявлення t(X;18) / SS18 є вирішальним критерієм діагностики синовіальної саркоми.
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Soft Tissue Sarcoma — міжнародні стандарти діагностики та системного лікування сарком м'яких тканин.
- ESMO–EURACAN Clinical Practice Guidelines: Soft tissue and visceral sarcomas: ESMO–EURACAN Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up — європейські протоколи ведення пацієнтів із саркомами.