Транслокація EWSR1 (FISH)
Транслокація EWSR1 (FISH) — це молекулярно-цитогенетичне дослідження методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), призначене для виявлення структурних перебудов гена EWSR1 (локус 22q12) у тканині пухлини.
Ген EWSR1 (Ewing Sarcoma Breakpoint Region 1) вступає в транслокації з різними генами-партнерами (найчастіше з родини ETS, такими як FLI1, ERG), утворюючи химерні онкобілкові транскрипційні фактори. Вони викликають неконтрольовану проліферацію клітин і блокують їхню нормальну диференціацію. Виявлення транслокації EWSR1 є «золотим стандартом» та вирішальним діагностичним критерієм для верифікації саркоми Юінга, а також критично важливим маркером у диференціальній діагностиці широкого спектра мезенхімальних, нейроепітеліальних та меланоцитарних новоутворень.
Клінічні показання до проведення дослідження
Молекулярно-цитогенетичний аналіз транслокації гена EWSR1 призначається онкологом, дитячим онкологом або патоморфологом у таких випадках:
- Диференційна діагностика пухлин із групи «дрібних круглих синіх клітин» (дрібноклітинні пухлини / small round blue cell tumors) у дітей та дорослих.
- Верифікація діагнозу саркоми Юінга / периферичної примітивної нейроектодермальної пухлини (pPNET).
- Підозра на інші EWSR1-асоційовані новоутворення: світлоклітинна саркома (Clear Cell Sarcoma / меланома м'яких тканин), десмопластична дрібнокруглоклітинна пухлина (DSRCT), позакісткова міксоїдна хондросаркома (EMC), міксоїдна ліпосаркома, ангіоматоїдна фіброзна гістіоцитома (AFH), міоепітеліома м'яких тканин та кісток.
- Невизначений або сумнівний результат імуногістохімічного (ІГХ) дослідження (наприклад, при атиповому імунофенотипі з вираженою експресією CD99 чи інших маркерів).
- Складні або морфологічно неоднозначні випадки мезенхімальних пухлин для точної нозологічної класифікації згідно з критеріями ВООЗ (WHO).
Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Зафіксована у формаліні та залита в парафін тканина пухлини (FFPE-блок), отримана під час трепан-біопсії, операційного видалення або резекції новоутворення. |
| Обов'язковий супровід | Разом із блоком обов'язково надається 1 контрольне гістологічне скло (H&E) або замовляється його виготовлення у лабораторії для картування ділянки пухлини. |
| Вимоги до тканини | Вміст пухлинних клітин у зрізі повинен становити 50-100 клітин. Наявність вираженого некротичного компонента або аутолізу знижує інформативність аналізу. |
| Транспортування | Доставка здійснюється при кімнатній температурі (+15…+25 °C) у захисному контейнері. Уникати нагрівання вище +30 °C (призводить до плавлення парафіну). Контейнер має бути щільно закритий та чітко маркований (ПІБ пацієнта, дата народження, анатомічний тип матеріалу). |
Критерії відбракування зразка
Зразок матеріалу може бути відхилено або оцінено як неінформативний через:
- Відсутність або недостатню кількість пухлинних клітин у наданому зрізі (50–100 клітин).
- Неадекватну первинну фіксацію тканини (використання формалінового розчину, тривала фіксація понад 48–72 години або гіпофіксація), що призводить до руйнування ДНК та високого рівня фон-автофлуоресценції.
- Проведення жорсткої декальцинації кісткових біоптатів із застосуванням концентрованих кислот (для кісткових сарком рекомендується використовувати м'які декальцинуючі розчини на основі ЕДТА).
- Відсутність маркування на блоці чи розбіжності з даними у бланку направлення. В такому випадку лабораторією проводиться уточнення даних.
Клінічні обмеження
Метод FISH із Break-Apart-зондом встановлює факт розриву хромосомного локусу гена EWSR1, але не визначає конкретного гена-партнера злиття (наприклад, FLI1, ERG, WT1, ATF1, CREB1 тощо). Оскільки перебудови EWSR1 зустрічаються при кількох різних типах сарком, остаточна нозологічна інтерпретація проводиться патоморфологом/онкологом у зіставленні з морфологією та ІГХ-профілем пухлини.
Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтесь послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для Вашого клінічного випадку. |
| 2 | Оформлення замовлення У бланку зазначаються попередній патоморфологічний діагноз, локалізація пухлини та клінічна мета дослідження. |
| 3 | Отримання біоматеріалу Пацієнт або його представник отримує заархівований парафіновий блок (FFPE) та контрольне скло (H&E) у патологоанатомічному відділенні за місцем проведення біопсії чи операції. |
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер із парафіновим блоком, склом та заповненим направленням (разом із копією первинного патоморфологічного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус локусу: транслокація гена EWSR1 виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер (із відокремленими 5'- та 3'-сигналами) серед проаналізованих пухлинних клітин.
Отримані цитогенетичні дані інтерпретуються лікарем у комплексі з морфологією пухлини.
Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) на парафінових зрізах із використанням специфічних ДНК-зондів типу Break-Apart (двоколірних зондів, фланкуючих ділянку розриву гена EWSR1 у локусі 22q12). |
| Аналітична процедура | Включає депарафінізацію зрізів, ферментативну протеолізну обробку, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
| Попередній контроль | Обов'язкове картування (маркування) пухлинної зони на контрольному склі H&E лікарем-патоморфологом перед проведенням гібридизації. |
| Критерії оцінки | Зразок вважається позитивним, якщо відсоток ядер із розщепленими (Break-Apart) зеленим та червоним сигналами перевищує аналітичний поріг (зазвичай >10% від загальної кількості підрахованих ядер). |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: морфології ядер та відсутності значних інгібуючих артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: оцінка сигналів у непухлинних клітинах строми/судин (нормальний злитий жовтий сигнал або зближені червоний і зелений сигнали слугують контролем ефективності гібридизації).
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
Суміжні тести та пакети
Для лікаря: корисні ресурси
- WHO Classification of Tumours: Soft Tissue and Bone Tumours — класифікація ВООЗ, де молекулярна детекція транслокацій EWSR1 є обов'язковим або рекомендованим критерієм діагностики.
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Bone Cancer / Soft Tissue Sarcoma — міжнародні стандарти ведення пацієнтів із саркомою Юінга та м'якотканинними саркомами.
- ESMO–EURACAN Clinical Practice Guidelines: Bone sarcomas: ESMO–EURACAN Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up — європейські протоколи діагностики та лікування кісткових сарком.