ПЛР JAK2 (якісно)
JAK2 — ген, який кодує тирозинкіназу, залучену до передавання сигналів від рецепторів факторів росту клітин крові. Мутація JAK2 V617F спричиняє постійну активацію сигнального шляху та є одним із основних драйверів класичних BCR::ABL1-негативних мієлопроліферативних неоплазій.
Якісне ПЛР-дослідження визначає наявність або відсутність мутації JAK2 V617F. Результат використовують як частину комплексної діагностики справжньої поліцитемії, есенціальної тромбоцитемії та первинного мієлофіброзу.
- Клінічні покази до проведення дослідження
Дослідження призначає гематолог або інший профільний лікар при підозрі на клональне мієлопроліферативне захворювання.
Показами можуть бути:
- стійке підвищення гемоглобіну, гематокриту або кількості еритроцитів без очевидної вторинної причини;
- стійкий тромбоцитоз або лейкоцитоз;
- спленомегалія, мікроциркуляторні симптоми або тромбоз незвичної локалізації в поєднанні зі змінами загального аналізу крові;
- підозра на справжню поліцитемію, есенціальну тромбоцитемію або первинний мієлофіброз;
- уточнення клональної природи змін кровотворення після виключення реактивних причин.
JAK2 V617F зазвичай є тестом першої лінії при підозрі на класичну BCR::ABL1-негативну мієлопроліферативну неоплазію. Він не застосовується як загальний онкологічний скринінг у людей без клінічних і лабораторних показів.
- Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Венозна кров або аспірат кісткового мозку, забрані у правильно промарковану пробірку з EDTA. |
| Зберігання та транспортування | Транспортувати у щільно закритій пробірці відповідно до чинних правил приймання лабораторії. Не заморожувати цільну кров або аспірат кісткового мозку; уникати перегрівання та тривалого зберігання. |
| Термін доставки матеріалу | Доставити до лабораторії якомога швидше після забору. Точний допустимий строк визначається чинними правилами приймання для крові та кісткового мозку. |
Критерії відбракування зразка
До початку виділення ДНК лабораторія перевіряє маркування, тип пробірки та придатність матеріалу. Зразок може бути відхилений або визнаний неінформативним через:
- відсутність або невідповідність маркування даним направлення;
- використання невідповідного антикоагулянта, наявність згортка або пошкодження пробірки;
- недостатній об’єм, дуже низьку клітинність чи виражену лейкопенію;
- порушення умов або строку транспортування, що могло призвести до деградації клітин і ДНК;
- недостатню кількість або якість виділеної ДНК чи невідповідність внутрішнього контролю ампліфікації.
Протипухлинне лікування може зменшувати частку мутантного клону. Це не є критерієм відбракування, але час забору матеріалу необхідно зазначити в направленні та враховувати під час інтерпретації.
- Як замовити дослідження
| 1 | Консультація перед замовленням (рекомендовано) Порадьтеся з гематологом. Якщо ви не впевнені, чи достатньо окремого тесту JAK2 V617F, чи потрібна панель JAK2/CALR/MPL або ширше NGS-профілювання, лікар допоможе обрати алгоритм відповідно до показників крові та клінічної підозри. |
| 2 | Заповнення направлення Заповніть електронне направлення заздалегідь — через особистий кабінет або разом із лікарем. Зазначте клінічну підозру, показники загального аналізу крові, рівень еритропоетину (за наявності), тромбози, попередні молекулярні дослідження та лікування. |
| 3 | Передача матеріалу Здайте венозну кров або передайте аспірат кісткового мозку в пробірці з EDTA до лабораторного офісу CSD LAB чи закладу-партнера разом із заповненим направленням. Переконайтеся, що дані на пробірці повністю відповідають даним у направленні. |
- Результат і рішення: як результат вплине на лікування
Позитивний результат означає, що мутацію JAK2 V617F виявлено вище аналітичної межі методу. Це підтверджує наявність клону клітин із відповідною мутацією та підтримує діагноз мієлопроліферативної неоплазії у відповідному клініко-морфологічному контексті.
Позитивний результат не дозволяє самостійно розрізнити справжню поліцитемію, есенціальну тромбоцитемію та первинний мієлофіброз. Для класифікації захворювання потрібні показники крові, морфологія кісткового мозку, рівень еритропоетину та інші критерії.
Негативний результат означає, що JAK2 V617F не виявлено вище межі чутливості. Він не виключає мієлопроліферативну неоплазію: при підозрі на есенціальну тромбоцитемію або мієлофіброз можуть досліджувати CALR і MPL, а при підозрі на справжню поліцитемію — мутації 12-го екзону JAK2.
Якісний тест призначений для первинного виявлення мутації. Для оцінки молекулярної відповіді або мінімальної залишкової хвороби потрібен спеціально валідований кількісний метод.
- Методологія та контроль якості (QC)
Дослідження виконується методом ПЛР у режимі реального часу та якісно визначає мутацію JAK2 V617F у ДНК клітин крові або кісткового мозку.
Аналітичний ліміт детекції становить 5% мутантної ДНК.
Контроль якості включає перевірку маркування й придатності зразка, контроль виділення ДНК, внутрішній контроль ампліфікації, позитивний і негативний контролі та оцінку валідності результату.
- Суміжні тести та пакети
Залежно від клінічної підозри можуть бути доцільними:
- M395 — CALR: L367fs*46 і K385fs*47, ПЛР;
- M397 — MPL: W515K, W515L, W515A і S505N, ПЛР;
- M415 — JAK2 (кількісний, 12 екзон, кров, ПЛР) при підозрі на справжню поліцитемію та негативному JAK2 V617F;
- F017 — BCR::ABL1 («Філадельфійська хромосома»), FISH, та M013 — BCR-ABL1 p210, кількісне визначення, ПЛР, для виключення хронічного мієлоїдного лейкозу у відповідній клінічній ситуації;
- M399 — базова панель для мієлопроліферативних новоутворень (JAK2, CALR, MPL, ПЛР, кров або кістковий мозок);
- M025 — MyAction Myeloid basic, NGS-панель для ширшого молекулярного профілювання мієлоїдних неоплазій;
- патогістологічне дослідження трепанобіоптату кісткового мозку.
- Для лікаря: посилання на гайдлайни/рекомендації
JAK2 V617F є основним драйверним маркером класичних BCR::ABL1-негативних мієлопроліферативних неоплазій, але не є самодостатнім діагностичним критерієм. Інтерпретація має відповідати чинній класифікації та включати клінічні, лабораторні й морфологічні ознаки.
Низькорівнева JAK2 V617F може виявлятися при клональному гемопоезі та не завжди означає клінічно сформовану неоплазію. Значення результату залежить від показників крові, симптомів, віку пацієнта й морфології кісткового мозку.
При негативному результаті алгоритм подальшого тестування залежить від фенотипу: CALR/MPL для ET або PMF, JAK2 exon 12 для PV, а також BCR::ABL1 та розширена NGS-панель за наявності відповідних показів.
Клінічні рекомендації та гайдлайни
- European LeukemiaNet: recommendations and publications
- European LeukemiaNet revised recommendations for Philadelphia-negative classical MPNs
Актуальні клінічні дослідження
FAQ для пацієнта
Позитивний JAK2 V617F означає лейкемію?
Не обов’язково. Мутація найчастіше пов’язана з мієлопроліферативними неоплазіями, але точний діагноз визначають за сукупністю аналізів і дослідженням кісткового мозку.
Чи можна за цим тестом визначити конкретне захворювання?
Ні. Одна й та сама мутація може виявлятися при справжній поліцитемії, есенціальній тромбоцитемії та первинному мієлофіброзі.
Що означає негативний результат?
Мутацію JAK2 V617F не виявлено вище чутливості методу. Це не виключає захворювання, оскільки можливі інші мутації — зокрема CALR, MPL або JAK2 exon 12.
Чи підходить якісний тест для контролю лікування?
Для точного кількісного моніторингу потрібне окреме валідоване дослідження, яке визначає частку мутантного алеля.