ПЛР Муковісцидоз
Що таке муковісцидоз та яка роль гена CFTR?
Муковісцидоз (кістозний фіброз) — це важке спадкове генетичне захворювання, яке характеризується системним ураженням залоз зовнішньої секреції. В основі патології лежать мутації гена CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator), який кодує структуру однойменного білка-каналу. Цей канал відповідає за транспортування іонів хлору через клітинну мембрану.
Коли виникає збій у гені CFTR, транспорт іонів порушується, що призводить до зневоднення та різкого згущення секретів усіх екзокринних залоз. Замість нормального рідкого слизу організм починає продукувати надзвичайно густий, в'язкий секрет. Він забиває вивідні протоки органів, викликаючи їхнє хронічне запалення, дистрофію та безповоротно руйнуючи тканини.
Що визначає це молекулярно-генетичне дослідження?
Існує понад 2000 різних дефектів у цьому локусі, проте більшість із них є вкрай рідкісними. Даний ДНК-тест на муковісцидоз у CSD LAB являє собою спеціально підібрану панель, яка визначає 18 найпоширеніших мутацій гена CFTR (включаючи поширену мутацію F508del). Це забезпечує максимальну діагностичну ефективність скринінгу серед європейської популяції.
Мутації, що досліджуються: G542X, W1282X, E92K, 1677delTA, K68E, 2789+5G>A ΔF508, 1717-1G>A, 4010delTATT, F1052V, I148T G551D, Y1032C, 3849+10kbC>T, R560T, 2183AA--G, S4X, N1303K.
Клінічні прояви та симптоми муковісцидозу
Клінічна картина захворювання залежить від форми патології, проте найчастіше вражаються дихальна та травна системи.
- Легенева форма проявляється через хронічні захворювання легень та рецидивуючі інфекції дихальних шляхів (важкі бронхіти, стійкі до лікування пневмонії), задишку, постійний приступоподібний кашель із виділенням в'язкого харкотиння, розвиток бронхоектазів.
- Кишкова форма супроводжується ферментною недостатністю підшлункової залози. Спостерігаються значні порушення травлення, хронічна діарея, синдром мальабсорбції (незасвоєння поживних речовин), здуття живота та затримка фізичного розвитку дитини.
- Змішана форма: поєднує симптоми ураження легень та шлунково-кишкового тракту (найбільш поширений варіант).
Клінічні покази до проведення дослідження
Генетична діагностика мутацій CFTR призначається в таких клінічних випадках:
- Підтвердження діагнозу: у дітей та дорослих із характерними клінічними ознаками (повторні легеневі інфекції, панкреатична недостатність, синдром втрати солі) або за наявності позитивного результату неонатального чи потового тесту.
- Позитивний неонатальний скринінг: якщо під час обов'язкового обстеження новонародженого в пологовому будинку виявлено підвищений рівень імунореактивного трипсиногену (ІРТ).
- Репродуктивне планування та ЕКЗ: визначення статусу здорового носійства мутацій у майбутніх батьків під час підготовки до природної вагітності або перед проведенням штучного запліднення, особливо якщо в родині були випадки кістозного фіброзу.
- Чоловіче безпліддя: при виявленні обструктивної азооспермії, викликаної вродженою двосторонньою відсутністю сім'явиносних проток (CBAVD), що часто є ізольованим проявом м'яких мутацій CFTR.
- Пренатальна та сімейна діагностика: обстеження родичів пацієнта із підтвердженим муковісцидозом для розрахунку індивідуального генетичного ризику народження хворої дитини.
Значення тесту при плануванні вагітності
Муковісцидоз успадковується за аутосомно-рецесивним типом. Це означає, що хвороба розвивається лише тоді, коли дитина отримує по одній мутантній копії гена від кожного з батьків.
Здорові люди, які є прихованими гетерозиготними носіями однієї мутації, не мають жодних симптомів хвороби і часто навіть не здогадуються про свій статус. Проте, якщо обоє батьків є носіями змін у гені CFTR, ризик народження дитини з муковісцидозом у такій парі становить 25% (1 із 4) при кожній вагітності. Тест на мутації CFTR дозволяє вчасно виявити цей ризик, провести генетичне консультування та скорегувати репродуктивний план (наприклад, застосувати ЕКЗ із передімплантаційною генетичною діагностикою PGT-M).
Матеріал і вимоги до зразка
Тип біоматеріалу: Венозна кров.
Контейнер: Вакуумна пробірка з антикоагулянтом К3-ЕДТА (фіолетова кришка).
Підготовка до дослідження: Спеціальних суворих обмежень немає. Рекомендується здавати кров натщесерце (вранці після 8-12 годин голоду) або через 3-4 години після легкого перекусу. Чисту воду можна пити без обмежень. За півгодини до маніпуляції варто уникати стресу, фізичних навантажень та паління.
Умови логістики: Кров транспортується в лабораторію за температури +2...+8 °C. Заморожування зразка не допускається.
Результат і вплив на лікування
Варіанти інтерпретації результатів:
| Виявлений генетичний статус | Що це означає? | Клінічні наслідки та рішення |
| Мутацій не виявлено | У межах досліджуваної панелі з 18 маркерів змін у гені CFTR не знайдено. | Ризик наявності або носійства хвороби зведений до мінімуму. Якщо клінічна картина залишається яскравою, за рішенням генетика може бути рекомендоване повне секвенування гена. |
| Виявлено 1 мутацію (Гетерозигота) | Людина має одну нормальну копію гена та одну змінену. | Носійство. Симптомів муковісцидозу немає. При плануванні дітей обов'язково потрібно обстежити партнера на наявність мутацій у цьому ж гені. |
| Виявлено 2 мутації (Гомозигота або компаунд-гетерозигота) | Обидві копії гена CFTR пошкоджені (однаковою мутацією або двома різними із панелі). | Клінічний та молекулярний діагноз: Муковісцидоз. Потрібне термінове направлення до спеціалізованого центру муковісцидозу для підбору терапії (ферменти, муколітики, таргетні коректори CFTR). |
Важливе уточнення, що негативний результат даної панелі з 18 мутацій визначає поширені мутації, але не скасовує діагноз на 100%, якщо у пацієнта є стійка клініка та високий рівень хлоридів поту. У таких випадках показано розширене генетичне дослідження методом NGS. При виникненні питань рекомендуємо отримати медико-генетичну консультацію від експерта CSD LAB.
Методологія та контроль якості (QC)
ПЛР-дослідження муковісцидозу базується на ампліфікації специфічних ділянок ДНК із подальшим аналізом наявності чи відсутності конкретних алельних варіантів (мутацій).
Генетичний результат є стабільним протягом життя і не змінюється залежно від поточного раціону, віку на момент здачі аналізу або наявності симптомів у день забору крові.
Контроль якості включає коректну ідентифікацію зразка, виділення ДНК, оцінку якості ДНК, проведення ПЛР з спеціальними контролями якості та інтерпретацію результату ПЛР відповідно до валідованої методики.
Суміжні тести та пакети
Для всебічної оцінки функцій органів, що страждають при муковісцидозі, генетичний тест доповнюють:
- Панкреатична еластаза (кал) (В239) — прямий маркер екзокринної недостатності підшлункової залози.
- Комплекс №7: Печінкові проби (К017) — для виключення супутнього фіброзу печінки чи застійних явищ у жовчовивідній системі.
- Загальний аналіз крові з лейкоцитарною формулою (B257) — для моніторингу активності запального процесу в легенях.
Для лікаря: корисні ресурси
Молекулярна діагностика кістозного фіброзу та трактування виявлених варіантів у CSD LAB виконуються відповідно до актуальних світових консенсусів:
- Гайдлайни ECFS — стандарти терапії, ведення пацієнтів та критерії скринінгу представлені Європейським товариством муковісцидозу ECFS Best Practice Guidelines.
- Рекомендації Cystic Fibrosis Foundation (CFF) — американські стандарти генетичного тестування та критерії оцінки функції гена доступні на Cystic Fibrosis Foundation Guidelines.
