Транслокація KMT2A (MLL) (11q23)
Перебудова гена KMT2A (MLL), 11q23.3 — це молекулярно-цитогенетичне дослідження для виявлення структурних перебудов гена KMT2A, раніше відомого як MLL. Аналіз виконують методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), який дозволяє оцінювати відповідні генетичні зміни безпосередньо в ядрах клітин.
Ген KMT2A розташований у хромосомній ділянці 11q23.3 і кодує білок, який бере участь у регуляції активності генів, зокрема важливих для розвитку та дозрівання клітин крові. Перебудови KMT2A можуть призводити до його злиття з іншими генами й утворення химерних білків, які порушують нормальні програми розвитку клітин та сприяють виникненню лейкемії.
FISH із зондами типу break-apart виявляє перебудову KMT2A, але не встановлює конкретного гена-партнера злиття. Для його визначення можуть знадобитися додаткові молекулярні дослідження. Результат оцінюють разом із морфологією клітин, імунофенотипуванням та іншими генетичними даними.
1. Клінічні показання до проведення дослідження
Основні показання:
- Підозра на гостру мієлоїдну лейкемію або уточнення її генетичного підтипу;
- діагностика В-лімфобластної лейкемії/лімфоми;
- обстеження при гострій лейкемії змішаного фенотипу;
- уточнення змін ділянки 11q23, виявлених під час каріотипування;
- пошук клінічно значущої перебудови, якщо стандартне цитогенетичне дослідження не дало інформативного результату.
Результат оцінюють разом із морфологією клітин, імунофенотипуванням та іншими генетичними дослідженнями.
2. Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Основний матеріал для дослідження при гострих лейкеміях — аспірат кісткового мозку. Периферична кров може бути придатною за наявності достатньої кількості циркулюючих бластних клітин. |
| Основні вимоги | Достатня кількість збережених клітин із ядрами, придатними для оцінювання FISH-сигналів. Низький вміст патологічних клітин, руйнування клітин або неналежне зберігання можуть обмежувати інформативність дослідження. |
| Транспортування | Периферичну кров та аспірат кісткового мозку транспортують у герметично закритих, промаркованих пробірках при температурі +2…+8 °C, у захисному пакуванні, яке запобігає пошкодженню пробірок і витіканню матеріалу. Не заморожувати та не перегрівати. Матеріал доставляють до лабораторії якомога швидше після забору. На пробірці зазначають ПІБ і дату народження пацієнта та тип матеріалу; у направленні — дату й час забору. Максимально допустимий строк доставки визначається чинними правилами приймання лабораторії для відповідного типу матеріалу. |
Критерії відбракування зразка
Недостатня кількість придатних клітин, пошкодження ядер або незадовільна якість гібридизації. Неінтерпретований результат не можна прирівнювати до висновку «перебудову не виявлено».
3. Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтеся послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для вашого клінічного випадку. |
| 2 | Супровідні дані Попередній або встановлений діагноз, мета дослідження, тип і дата забору матеріалу, відомості про проведене лікування. Бажано додати результати морфологічного дослідження, проточної цитометрії, каріотипування та попередніх молекулярних тестів. |
| 3 | Отримання біоматеріалу Процедура та місце забору повністю залежать від типу матеріалу:
|
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер з аспіратом та заповненим направленням (разом із копією первинного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
4. Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус: перебудову гена KMT2A виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер (із відокремленими 5'- та 3'-сигналами) серед проаналізованих пухлинних клітин.
Якщо перебудову KMT2A виявлено: результат допомагає визначити генетичний підтип лейкемії. Для встановлення конкретного гена-партнера злиття можуть знадобитися додаткові дослідження, оскільки FISH із зондами типу break-apart не визначає партнера.
Прогностичне значення залежить від типу лейкемії та конкретної перебудови. За класифікацією ELN 2022 для дорослих із гострою мієлоїдною лейкемією, переважно в контексті інтенсивного лікування, t(9;11), пов’язана зі злиттям KMT2A та MLLT3, належить до проміжного ризику; інші перебудови KMT2A — до несприятливого. Ці категорії не можна автоматично переносити на гостру лімфобластну лейкемію або дитячі протоколи лікування.
Виявлення перебудови також може мати значення для розгляду таргетної терапії. Зокрема, FDA схвалило інгібітор меніну ревуменіб для дорослих і дітей віком від одного року з рецидивною або рефрактерною гострою лейкемією з транслокацією KMT2A. Можливість застосування визначає лікар з урахуванням показань, реєстрації та доступності препарату.
Якщо перебудову не виявлено: у дослідженому зразку не встановлено змін, які визначає використана система зондів. Такий результат не виключає гострої лейкемії або інших генетичних порушень.
5. Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) із використанням специфічних ДНК-зондів типу Break-Apart (двоколірних зондів, що фланкують ділянку розриву гена KMT2A). |
| Обмеження методу | Дослідження не призначене для виявлення точкових мутацій або часткових тандемних дуплікацій KMT2A (KMT2A-PTD). Окремі приховані перебудови також можуть потребувати додаткового молекулярного аналізу. FISH не замінює комплексного цитогенетичного обстеження. Для моніторингу вимірюваної залишкової хвороби використовують чутливіші валідовані методи відповідно до типу лейкемії. |
| Аналітична процедура | Включає фіксацію та підготовку препарату, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК-мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
| Критерії оцінки | Результат визначають за характером сигналів і часткою ядер з аберантним патерном відповідно до валідованого лабораторного порогу для використаного набору зондів KMT2A break-apart. При прикордонних або нетипових результатах може знадобитися оцінка додаткових клітин чи уточнювальне дослідження. |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: оцінка морфології ядер та відсутності значних інгібувальних артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: оцінка сигналів у резидуальних непухлинних клітинах гемопоезу (наявність нормального злитого жовтого сигналу або суміжних червоного та зеленого сигналів у здорових клітинах підтверджує технічну ефективність та специфічність гібридизації).
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
6. Суміжні тести та пакети
- Визначення мінімальної резидуальної хвороби (встановлення цитоморфологічної ремісії, проточна цитометрія за наявністю первинного фенотипу)
- Цитогенетичне дослідження при онкогематологічних захворюваннях (каріотипування)
- Діагностика гострих лейкозів (цитоморфологічне дослідження, імунофенотип, цитохімічне встановлення FAB-варіанту)
7. Для лікаря: корисні ресурси
- Döhner H. et al. Diagnosis and management of AML in adults: 2022 recommendations from an international expert panel on behalf of the ELN. Blood. 2022;140(12):1345–1377. Рекомендації з діагностики та лікування гострої мієлоїдної лейкемії у дорослих. Містять класифікацію генетичного ризику, зокрема для t(9;11)/MLLT3::KMT2A та інших перебудов KMT2A.
- Gökbuget N. et al. Diagnosis, prognostic factors, and assessment of ALL in adults: 2024 ELN recommendations from a European expert panel. Blood. 2024;143(19):1891–1902. Рекомендації щодо діагностики, генетичної характеристики та оцінки ризику гострої лімфобластної лейкемії у дорослих, включно із захворюваннями з перебудовами KMT2A.
- U.S. Food and Drug Administration. FDA approves revumenib for relapsed or refractory acute leukemia with a KMT2A translocation. 15 November 2024. Офіційне повідомлення про схвалення інгібітора меніну ревуменібу для дорослих і дітей віком від одного року з рецидивною або рефрактерною гострою лейкемією з транслокацією KMT2A.