ПЛР MGMT

MGMT кодує фермент репарації ДНК O6-метилгуанін-ДНК-метилтрансферазу. Він видаляє ушкодження ДНК, спричинені алкілувальними препаратами. Метилювання промоторної ділянки MGMT може знижувати активність гена та здатність пухлинних клітин відновлювати такі ушкодження.

Статус метилювання промотору MGMT є клінічно значущим біомаркером при дифузних гліомах, особливо гліобластомі. Він допомагає оцінити ймовірність користі від терапії алкілувальними препаратами, зокрема темозоломідом, і має прогностичне значення в певних клінічних групах. 

1. Клінічні покази до проведення дослідження

Дослідження призначає нейроонколог, онколог, нейрохірург або патоморфолог після морфологічної верифікації пухлини центральної нервової системи.

•    вперше діагностована гліобластома — для прогностичної та предиктивної оцінки;
•    дифузна гліома, коли MGMT-статус потрібний для вибору або уточнення лікувальної тактики;
•    пацієнти старшого віку або з обмеженим функціональним статусом, коли результат може впливати на вибір між променевою терапією та темозоломідом;
•    рецидив гліальної пухлини, якщо статус MGMT раніше не визначався або доступний новий репрезентативний матеріал;
•    комплексна молекулярна характеристика гліоми разом зі статусом IDH, 1p/19q та іншими маркерами.

MGMT не є тестом для скринінгу пухлин мозку й не замінює гістологічний та інтегрований молекулярний діагноз. 

2. Матеріал і вимоги до зразка

Критерії відбракування зразка

До початку метилспецифічної ПЛР патолог оцінює репрезентативність матеріалу. Зразок може бути відхилений або визнаний неінформативним через:

•    недостатню частку пухлинних клітин або відсутність репрезентативної ділянки пухлини;
•    виражений некроз, крововиливи або значні артефакти фіксації та гістологічної обробки;
•    декальцинацію, надмірну/недостатню фіксацію чи інші фактори, що спричиняють деградацію ДНК;
•    недостатню кількість матеріалу, пошкодження блока;
•    невідповідність маркування матеріалу даним направлення.

Після виділення ДНК матеріал може бути відхилений через недостатню кількість або якість ДНК, неуспішну бісульфітну конверсію чи невідповідність внутрішнього контролю ампліфікації. У такому разі може знадобитися інший блок або зразок. 

3. Як замовити дослідження

4. Результат і рішення: як результат вплине на лікування

Позитивний результат означає, що частка метильованої промоторної ділянки MGMT досягає або перевищує встановлений для тесту поріг. У гліобластомі та деяких інших дифузних гліомах такий статус у середньому пов’язаний із більшою ймовірністю користі від алкілувальної терапії та сприятливішим прогнозом порівняно з неметильованим статусом.

Негативний результат означає, що метилювання не виявлено вище порогового рівня. Він може бути пов’язаний із меншою чутливістю до темозоломіду, але не доводить повну відсутність користі від лікування і не є самостійною підставою для його скасування.

Неінформативний результат можливий при недостатній кількості пухлинних клітин, низькій якості ДНК або невідповідності матеріалу вимогам методу.

Остаточне лікувальне рішення приймають з урахуванням віку, функціонального стану, типу та молекулярного класу пухлини, обсягу операції та інших клінічних факторів. 

5. Методологія та контроль якості (QC)

ДНК виділяють із вибраної ділянки пухлинного матеріалу та піддають бісульфітній конверсії, яка дає змогу розрізнити метильовані й неметильовані послідовності. Після цього виконують метилспецифічну ПЛР у режимі реального часу.

Контроль якості включає морфологічну оцінку зразка, контроль виділення та бісульфітної конверсії ДНК, внутрішній контроль ампліфікації, позитивний і негативний контролі та перевірку валідності результату. 

6. Суміжні тести та пакети

Для інтегрованої діагностики пухлин центральної нервової системи можуть бути доцільними:

•    M015 — IDH1/IDH2, таргетна ПЛР;
•    F055 та F056 — оцінка делецій 1p і 19q;
•    H233 — діагностична ІГХ 3 категорії складності для пухлин головного та спинного мозку, зокрема з оцінкою IDH1 R132H, ATRX, p53 та інших маркерів за клініко-морфологічними показами;
•    молекулярна оцінка TERT, EGFR та CDKN2A/B у відповідній клінічній ситуації;
•    M402 — MyAction Solid tumor DNA, M367 — MyAction PanCancer, M396 — MyAction Tumor Profile Complete або M063 — FoundationOne CDx для розширеного NGS-профілювання, якщо таргетних тестів недостатньо. 
   

7. Для лікаря: посилання на гайдлайни/рекомендації

MGMT-статус слід інтерпретувати в межах конкретного гістомолекулярного діагнозу. Найкраще підтверджена предиктивна роль стосується алкілувальної терапії при гліобластомі; клінічне значення в інших типах гліом може відрізнятися.

Результат залежить від тест-системи, порогу, частки пухлинних клітин і внутрішньопухлинної гетерогенності. Значення поблизу порогу слід оцінювати обережно, особливо при низькій клітинності або після лікування.

Метилювання MGMT не є стабільною спадковою мутацією і не використовується для оцінки сімейного ризику. Воно не замінює визначення IDH та інших маркерів, необхідних для інтегрованої класифікації пухлин ЦНС. 

Клінічні рекомендації та гайдлайни

•    EANO guidelines on the diagnosis and treatment of diffuse gliomas of adulthood
•    EANO guideline: molecular diagnostic tools for the WHO 2021 classification of gliomas

Актуальні клінічні дослідження

•    Пошук діючих клінічних досліджень гліобластоми за статусом MGMT 

FAQ для пацієнта

Що означає метилювання MGMT?
Це епігенетична зміна, яка може знижувати активність гена репарації ДНК у пухлинних клітинах.

Позитивний результат означає, що темозоломід точно подіє?
Ні. Метильований статус підвищує ймовірність користі в певних клінічних ситуаціях, але не гарантує відповідь.

Чи можна відмовитися від лікування при негативному результаті?
Ні. Вибір лікування залежить не лише від MGMT, а й від типу пухлини, віку, функціонального стану та інших факторів.

Чи є метилювання MGMT спадковим?
Ні. Це зміна в пухлинних клітинах, а не тест на спадкову схильність до раку.