ПЛР MGMT
MGMT кодує фермент репарації ДНК O6-метилгуанін-ДНК-метилтрансферазу. Він видаляє ушкодження ДНК, спричинені алкілувальними препаратами. Метилювання промоторної ділянки MGMT може знижувати активність гена та здатність пухлинних клітин відновлювати такі ушкодження.
Статус метилювання промотору MGMT є клінічно значущим біомаркером при дифузних гліомах, особливо гліобластомі. Він допомагає оцінити ймовірність користі від терапії алкілувальними препаратами, зокрема темозоломідом, і має прогностичне значення в певних клінічних групах.
- Клінічні покази до проведення дослідження
Дослідження призначає нейроонколог, онколог, нейрохірург або патоморфолог після морфологічної верифікації пухлини центральної нервової системи.
- вперше діагностована гліобластома — для прогностичної та предиктивної оцінки;
- дифузна гліома, коли MGMT-статус потрібний для вибору або уточнення лікувальної тактики;
- пацієнти старшого віку або з обмеженим функціональним статусом, коли результат може впливати на вибір між променевою терапією та темозоломідом;
- рецидив гліальної пухлини, якщо статус MGMT раніше не визначався або доступний новий репрезентативний матеріал;
- комплексна молекулярна характеристика гліоми разом зі статусом IDH, 1p/19q та іншими маркерами.
MGMT не є тестом для скринінгу пухлин мозку й не замінює гістологічний та інтегрований молекулярний діагноз.
- Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | FFPE-блок із репрезентативною пухлинною тканиною та H&E-скельце; цитологічні скельця |
| Зберігання та транспортування | Температура +8…+25°C. Блоки та скельця не заморожувати. Зберігати в сухому захищеному пакуванні, уникати перегрівання та механічного пошкодження. |
| Термін зберігання блоку | FFPE-блок — бажано не більше 5 років від моменту виготовлення. Придатність архівного матеріалу визначають після морфологічної оцінки й контролю якості ДНК. |
Критерії відбракування зразка
До початку метилспецифічної ПЛР патолог оцінює репрезентативність матеріалу. Зразок може бути відхилений або визнаний неінформативним через:
- недостатню частку пухлинних клітин або відсутність репрезентативної ділянки пухлини;
- виражений некроз, крововиливи або значні артефакти фіксації та гістологічної обробки;
- декальцинацію, надмірну/недостатню фіксацію чи інші фактори, що спричиняють деградацію ДНК;
- недостатню кількість матеріалу, пошкодження блока;
- невідповідність маркування матеріалу даним направлення.
Після виділення ДНК матеріал може бути відхилений через недостатню кількість або якість ДНК, неуспішну бісульфітну конверсію чи невідповідність внутрішнього контролю ампліфікації. У такому разі може знадобитися інший блок або зразок.
- Як замовити дослідження
| 1 | Консультація перед замовленням (рекомендовано) Порадьтеся з нейроонкологом, онкологом, нейрохірургом або патоморфологом. Якщо ви не впевнені, чи потрібен окремий MGMT-тест або ширша молекулярна панель пухлин ЦНС, лікар допоможе обрати оптимальний варіант. |
| 2 | Заповнення направлення Заповніть електронне направлення заздалегідь — через особистий кабінет або разом із лікарем. Зазначте локалізацію пухлини, гістомолекулярний діагноз, дату операції/біопсії, статус IDH та 1p/19q, попереднє лікування й клінічне питання. |
| 3 | Передача матеріалу Передайте FFPE-блок і H&E-скельце до лабораторного офісу CSD LAB чи закладу-партнера разом із копією морфологічного висновку та направленням. Для блока бажано виконати попередню реєстрацію із зазначенням номера блока. |
- Результат і рішення: як результат вплине на лікування
Позитивний результат означає, що частка метильованої промоторної ділянки MGMT досягає або перевищує встановлений для тесту поріг. У гліобластомі та деяких інших дифузних гліомах такий статус у середньому пов’язаний із більшою ймовірністю користі від алкілувальної терапії та сприятливішим прогнозом порівняно з неметильованим статусом.
Негативний результат означає, що метилювання не виявлено вище порогового рівня. Він може бути пов’язаний із меншою чутливістю до темозоломіду, але не доводить повну відсутність користі від лікування і не є самостійною підставою для його скасування.
Неінформативний результат можливий при недостатній кількості пухлинних клітин, низькій якості ДНК або невідповідності матеріалу вимогам методу.
Остаточне лікувальне рішення приймають з урахуванням віку, функціонального стану, типу та молекулярного класу пухлини, обсягу операції та інших клінічних факторів.
- Методологія та контроль якості (QC)
ДНК виділяють із вибраної ділянки пухлинного матеріалу та піддають бісульфітній конверсії, яка дає змогу розрізнити метильовані й неметильовані послідовності. Після цього виконують метилспецифічну ПЛР у режимі реального часу.
Контроль якості включає морфологічну оцінку зразка, контроль виділення та бісульфітної конверсії ДНК, внутрішній контроль ампліфікації, позитивний і негативний контролі та перевірку валідності результату.
- Суміжні тести та пакети
Для інтегрованої діагностики пухлин центральної нервової системи можуть бути доцільними:
- M015 — IDH1/IDH2, таргетна ПЛР;
- F055 та F056 — оцінка делецій 1p і 19q;
- H233 — діагностична ІГХ 3 категорії складності для пухлин головного та спинного мозку, зокрема з оцінкою IDH1 R132H, ATRX, p53 та інших маркерів за клініко-морфологічними показами;
- молекулярна оцінка TERT, EGFR та CDKN2A/B у відповідній клінічній ситуації;
- M402 — MyAction Solid tumor DNA, M367 — MyAction PanCancer, M396 — MyAction Tumor Profile Complete або M063 — FoundationOne CDx для розширеного NGS-профілювання, якщо таргетних тестів недостатньо.
- Для лікаря: посилання на гайдлайни/рекомендації
MGMT-статус слід інтерпретувати в межах конкретного гістомолекулярного діагнозу. Найкраще підтверджена предиктивна роль стосується алкілувальної терапії при гліобластомі; клінічне значення в інших типах гліом може відрізнятися.
Результат залежить від тест-системи, порогу, частки пухлинних клітин і внутрішньопухлинної гетерогенності. Значення поблизу порогу слід оцінювати обережно, особливо при низькій клітинності або після лікування.
Метилювання MGMT не є стабільною спадковою мутацією і не використовується для оцінки сімейного ризику. Воно не замінює визначення IDH та інших маркерів, необхідних для інтегрованої класифікації пухлин ЦНС.
Клінічні рекомендації та гайдлайни
- EANO guidelines on the diagnosis and treatment of diffuse gliomas of adulthood
- EANO guideline: molecular diagnostic tools for the WHO 2021 classification of gliomas
Актуальні клінічні дослідження
FAQ для пацієнта
Що означає метилювання MGMT?
Це епігенетична зміна, яка може знижувати активність гена репарації ДНК у пухлинних клітинах.
Позитивний результат означає, що темозоломід точно подіє?
Ні. Метильований статус підвищує ймовірність користі в певних клінічних ситуаціях, але не гарантує відповідь.
Чи можна відмовитися від лікування при негативному результаті?
Ні. Вибір лікування залежить не лише від MGMT, а й від типу пухлини, віку, функціонального стану та інших факторів.
Чи є метилювання MGMT спадковим?
Ні. Це зміна в пухлинних клітинах, а не тест на спадкову схильність до раку.
