BRAF (codon V600, ПЛР)
BRAF — ген, який кодує білок сигнального шляху MAPK і бере участь у регуляції росту та поділу клітин. Соматичні мутації в кодоні 600 можуть призводити до постійної активації цього шляху та підтримувати ріст пухлини.
Дослідження методом ПЛР виявляє визначені мутації BRAF у ділянці кодону 600. Залежно від типу пухлини результат може мати діагностичне, прогностичне або предиктивне значення та впливати на вибір таргетної терапії.
- Клінічні покази до проведення дослідження
Дослідження призначає онколог, гематолог, ендокринолог або інший профільний фахівець після морфологічного чи клініко-гематологічного підтвердження захворювання.
Тест може бути доцільним у таких ситуаціях:
- меланома, коли статус BRAF V600 може впливати на вибір системної таргетної терапії;
- недрібноклітинний рак легень та окремі інші солідні пухлини, для яких BRAF V600 є клінічно значущою молекулярною мішенню;
- пухлини щитоподібної залози — як допоміжний молекулярний маркер у комплексі з цитологічними та морфологічними даними;
- волосатоклітинна лейкемія та гістіоцитарні неоплазії — для підтримки діагнозу й молекулярної характеристики захворювання;
- уточнення результату широкого молекулярного профілювання або швидка оцінка hotspot-ділянки BRAF перед прийняттям клінічного рішення.
Тест не призначений для первинного скринінгу раку або оцінки спадкового ризику: у більшості клінічних ситуацій досліджують соматичну зміну в пухлинних клітинах.
- Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | FFPE-блок із пухлинною тканиною та H&E-скельце; цитологічні скельця або цитоблок; для окремих гематологічних захворювань — венозна кров або аспірат кісткового мозку в EDTA. |
| Зберігання та транспортування | FFPE-блоки та цитологічні матеріали: +8…+25°C, сухе захищене пакування, не заморожувати. Кров або аспірат кісткового мозку: транспортувати у промаркованій пробірці з EDTA відповідно до чинних правил приймання; не заморожувати. |
| Термін зберігання / доставки | FFPE-блок — бажано не більше 5 років від моменту виготовлення. Кров, аспірат кісткового мозку та цитологічний матеріал передають до лабораторії якомога швидше після отримання. |
Критерії відбракування зразка
До початку молекулярного аналізу лабораторія оцінює придатність матеріалу. Зразок може бути відхилений або визнаний неінформативним через:
- відсутність репрезентативної пухлинної ділянки або недостатню частку пухлинних клітин;
- виражений некроз, крововиливи, неналежну фіксацію, декальцинацію чи інші фактори, що погіршують якість ДНК;
- недостатню кількість матеріалу, пошкодження блока, цитоблока або скелець;
- для крові чи аспірату кісткового мозку — невідповідну пробірку, згорток, недостатній об’єм або низьку клітинність;
- невідповідність маркування матеріалу даним направлення.
Після виділення ДНК матеріал може бути відхилений через недостатню її кількість, високу фрагментацію, низьку якість або невідповідність внутрішнього контролю ампліфікації. За можливості може знадобитися інший зразок.
- Як замовити дослідження
| 1 | Консультація перед замовленням (рекомендовано) Порадьтеся з онкологом, гематологом, ендокринологом або патоморфологом. Якщо ви не впевнені, чи достатньо таргетного BRAF V600-тесту, чи потрібна ширша панель, лікар допоможе обрати дослідження відповідно до типу пухлини та клінічного завдання. |
| 2 | Заповнення направлення Заповніть електронне направлення заздалегідь — через особистий кабінет або разом із лікарем. Зазначте діагноз, локалізацію, морфологічний тип, стадію, попереднє лікування, мету тестування та тип доступного матеріалу. |
| 3 | Передача матеріалу Передайте FFPE-блок і H&E-скельце, цитологічний матеріал або пробірку з кров’ю/аспіратом кісткового мозку до лабораторного офісу CSD LAB чи закладу-партнера разом із копією морфологічного висновку та направленням. Для блока бажано виконати попередню реєстрацію із зазначенням номера блока. |
- Результат і рішення: як результат вплине на лікування
У звіті зазначають, чи виявлено мутацію BRAF у кодоні 600, та наводять назву визначеного варіанта, якщо його ідентифіковано.
Позитивний результат означає, що у досліджуваному матеріалі виявлено мутацію BRAF V600. Її клінічне значення залежить від типу пухлини: в одних захворюваннях вона допомагає підтвердити молекулярний підтип, в інших — може бути предиктивним маркером чутливості до BRAF- або BRAF/MEK-таргетної терапії.
Негативний результат означає, що мутації, охоплені тест-системою, не виявлені вище аналітичної межі. Це не виключає рідкісні не-V600 варіанти BRAF, інші зміни MAPK-шляху або наявність мутації в частці клітин нижче чутливості методу.
Неінформативний результат можливий при недостатній кількості пухлинних клітин, низькій якості ДНК або невідповідності зразка вимогам методу.
- Методологія та контроль якості (QC)
Дослідження виконується методом ПЛР у режимі реального часу на ДНК, виділеній із біоматеріалу. Метод спрямований на якісне виявлення визначених мутацій у hotspot-ділянці кодону 600 гена BRAF.
Аналітичний ліміт детекції становить 1% мутантної ДНК.
Контроль якості включає морфологічну оцінку зразка, контроль виділення ДНК, внутрішні позитивні й негативні контролі реакції та перевірку валідності отриманого сигналу.
- Суміжні тести та пакети
Залежно від типу пухлини та клінічного завдання можуть бути доцільними:
- M353 — розширена ПЛР-панель для меланоми: BRAF, C-KIT і NRAS;
- M354 — базова ПЛР-панель для меланоми: BRAF і C-KIT;
- M078 — MyControl BRAF, дослідження циркулюючої пухлинної ДНК у крові;
- M023 — базова ПЛР-панель для раку щитоподібної залози: KRAS, NRAS, BRAF і HRAS;
- M373 — MyAction Lung, NGS-панель для раку легень;
- M355 — базова ДНК-панель для раку легень: EGFR, KRAS і BRAF, ПЛР;
- M402 — MyAction Solid tumor DNA, M367 — MyAction PanCancer, M396 — MyAction Tumor Profile Complete або M063 — FoundationOne CDx для розширеного NGS-профілювання солідної пухлини та одночасної оцінки BRAF й інших клінічно значущих генів;
- морфологічне та імуногістохімічне дослідження відповідно до локалізації пухлини.
- Для лікаря: посилання на гайдлайни/рекомендації
BRAF V600 є контекст-залежним біомаркером. Предиктивне значення конкретного варіанта та доступні варіанти терапії визначаються типом пухлини, стадією захворювання, попереднім лікуванням і чинними клінічними рекомендаціями.
Таргетна ПЛР оцінює лише визначену hotspot-ділянку. Негативний результат не виключає не-V600 мутації BRAF, злиття BRAF, зміни NRAS, KRAS, MAP2K1 та інші механізми активації MAPK-шляху. За достатнього матеріалу та потреби в ширшій молекулярній характеристиці доцільно розглянути NGS-панель.
Для тканинних зразків слід враховувати частку пухлинних клітин, якість фіксації та можливу внутрішньопухлинну гетерогенність. Результат не замінює морфологічний діагноз і має інтерпретуватися в межах мультидисциплінарного рішення.
Клінічні рекомендації та гайдлайни
- EANO guideline on rational molecular testing of gliomas and related tumors (2023)
- ESMO Clinical Practice Guideline: metastatic non-small-cell lung cancer
Актуальні клінічні дослідження
FAQ для пацієнта
Чи підтверджує позитивний BRAF-тест рак?
Ні. Діагноз встановлюють за результатами морфологічного дослідження. BRAF-тест допомагає визначити молекулярні особливості вже виявленої пухлини.
Що означає мутація BRAF V600?
Це зміна в ділянці гена BRAF, яка може активувати сигнальний шлях росту клітин. Її клінічне значення залежить від типу пухлини.
Чи означає позитивний результат, що таргетна терапія обов’язково подіє?
Ні. Результат може підтримувати вибір певної терапії, але ефективність залежить від типу пухлини, стадії, супутніх змін і стану пацієнта.
Що робити при негативному результаті?
Лікар оцінить, чи достатньо цього тесту, чи потрібне ширше молекулярне профілювання інших генів або типів варіантів.
