Транслокація t(3;14) BCL6 (ba probe) (FISH)
Транслокація t(3;14) BCL6 (ba probe) (FISH) — це молекулярно-цитогенетичне дослідження для виявлення структурних перебудов гена BCL6, розташованого в хромосомній ділянці 3q27. Аналіз виконують методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH) із використанням двоколірного ДНК-зонда типу Break-Apart.
Ген BCL6 кодує білок, який регулює активність інших генів і відіграє важливу роль у функціонуванні В-лімфоцитів гермінативних центрів — ділянок лімфоїдної тканини, де відбувається дозрівання імунної відповіді. Перебудови BCL6 можуть порушувати регуляцію його експресії та сприяти розвитку В-клітинних лімфом.
Однією з таких перебудов є транслокація t(3;14)(q27;q32) за участю BCL6 та локусу IGH — генів важких ланцюгів імуноглобулінів. Водночас BCL6 може перебудовуватися за участю інших генів-партнерів. Зонд Break-Apart виявляє перебудову BCL6 незалежно від конкретного партнера, але не встановлює його ідентичності.
1. Клінічні показання до проведення дослідження
Дослідження призначають гематолог, онколог або лікар-патоморфолог у межах комплексної діагностики В-клітинних лімфом:
- Діагностика дифузної великоклітинної В-клітинної лімфоми та інших агресивних В-клітинних лімфом — для уточнення генетичних характеристик пухлини.
- Виявлена перебудова MYC — для оцінки наявності супутньої перебудови BCL6 разом із дослідженням BCL2.
- Уточнення типу лімфоми при нетиповій морфології або неоднозначних результатах імуногістохімічного дослідження.
- Додаткова діагностика окремих випадків фолікулярної лімфоми — за рішенням лікаря-патоморфолога, з урахуванням морфологічних та імуногістохімічних характеристик.
Перебудову BCL6 оцінюють у контексті загального генетичного профілю пухлини. Її наявність сама по собі не визначає окремий тип лімфоми та не є достатньою для встановлення діагнозу лімфоми з подвійною перебудовою — «double-hit».
2. Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Парафіновий блок із тканиною пухлини (FFPE-блок) та контрольне гістологічне скло H&E. Також можна використовувати аспірат кісткового мозку, зібраний у пробірку з антикоагулянтом ЕДТА, за умови підтвердженого діагнозу лімфоми та наявності пухлинних клітин у матеріалі |
| Обов'язковий супровід | Для гістологічного матеріалу надають контрольне скло H&E та копію патоморфологічного висновку. За відсутності контрольного скла можливість його виготовлення узгоджують із лабораторією. Для аспірату кісткового мозку додають висновок, що підтверджує діагноз лімфоми, та результати морфологічного дослідження та/або проточної цитометрії, що підтверджують наявність пухлинних клітин у зразку |
| Вимоги до зразку | Вміст пухлинних клітин у зрізі повинен становити 50-100 клітин. Наявність вираженого некротичного компонента або аутолізу знижує інформативність аналізу. Для аспірату кісткового мозку: зразок повинен містити пухлинні клітини та достатню кількість збережених ядер, придатних для оцінювання FISH-сигналів. Кількість ядер для аналізу визначають відповідно до валідованої лабораторної методики. Низький вміст пухлинних клітин може обмежувати чутливість дослідження |
| Транспортування | Доставка здійснюється при кімнатній температурі (+15…+25 °C. Парафіновий блок і контрольне гістологічне скло H&E транспортують у захисному пакуванні, яке запобігає механічному пошкодженню. Слід уникати перегрівання та впливу прямих сонячних променів. |
Критерії відбракування зразка
Зразок матеріалу може бути відхилено або оцінено як неінформативний через:
- Відсутність або недостатню кількість пухлинних клітин у наданому зрізі (50–100 клітин).
- Неадекватну первинну фіксацію тканини (використання формалінового розчину, тривала фіксація понад 48–72 години або гіпофіксація), що призводить до руйнування ДНК та високого рівня фонової автофлуоресценції.
- Проведення жорсткої декальцинації кісткових біоптатів із застосуванням концентрованих кислот (для кісткових сарком рекомендується використовувати м'які декальцинувальні розчини на основі ЕДТА).
- Відсутність маркування на блоці чи розбіжності з даними у бланку направлення. У такому випадку лабораторія проводить уточнення даних.
Клінічні обмеження
Дослідження виявляє структурні перебудови в ділянці, яку охоплює зонд. Воно не визначає конкретного гена-партнера злиття, точкових мутацій BCL6 або рівня експресії білка BCL6. Деякі нетипові чи складні перебудови можуть потребувати додаткових молекулярних досліджень.
Експресія білка BCL6 за результатами імуногістохімії не є підтвердженням перебудови гена BCL6. Ці дослідження оцінюють різні характеристики пухлини.
Результат «перебудову BCL6 не виявлено» не виключає В-клітинної лімфоми. Його інтерпретують разом із морфологічними, імуногістохімічними та клінічними даними.
3. Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтесь послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для Вашого клінічного випадку. |
| 2 | Оформлення замовлення У бланку зазначаються попередній патоморфологічний діагноз, локалізація пухлини та клінічна мета дослідження. |
| 3 | Отримання біоматеріалу Для дослідження тканини пацієнт або його представник отримує парафіновий блок і контрольне гістологічне скло в установі, де виконували патоморфологічне дослідження. Для дослідження аспірату кісткового мозку забір здійснюють у медичному закладі в пробірку з антикоагулянтом ЕДТА |
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер із парафіновим блоком, склом та заповненим направленням (разом із копією первинного патоморфологічного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
4. Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус локусу: перебудову гена BCL6 виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер (із відокремленими 5′- та 3′-сигналами) серед проаналізованих пухлинних клітин.
Виявлення перебудови BCL6 допомагає уточнити генетичний профіль лімфоми. Її клінічне значення залежить від морфології пухлини та наявності інших перебудов, насамперед MYC і BCL2.
Виявлення перебудови BCL6 допомагає уточнити генетичні характеристики лімфоми. Її клінічне значення оцінюють разом із морфологією, імуногістохімією та результатами інших генетичних досліджень.
При агресивних В-клітинних лімфомах може бути рекомендоване додаткове визначення перебудов MYC і BCL2, зокрема в межах комплексу F042 «Діагностика високоагресивної В-клітинної лімфоми». Наявність перебудови BCL6 сама по собі не визначає групу ризику або схему лікування.
Сам по собі результат BCL6 FISH не визначає схему лікування. Гематолог або онколог обирає тактику після встановлення інтегрованого діагнозу, з урахуванням стадії захворювання та стану пацієнта.
5. Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) на парафінових зрізах пухлинної тканини або препаратах аспірату кісткового мозку з використанням специфічних ДНК-зондів для виявлення перебудов гена BCL6. |
| Аналітична процедура | Підготовку зразка проводять залежно від типу матеріалу. Для парафінових зрізів виконують депарафінізацію та підготовку тканини; для аспірату кісткового мозку — підготовку клітинних препаратів відповідно до валідованої лабораторної методики. Подальші етапи включають денатурацію ДНК, гібридизацію із зондами, відмивання та оцінювання сигналів за допомогою флуоресцентного мікроскопа. |
| Попередній контроль | Для гістологічного матеріалу лікар-патоморфолог оцінює контрольне скло H&E та маркує ділянку пухлинної тканини для дослідження. Для аспірату кісткового мозку генетик обирає ділянки препарату з добре збереженими, достатньо розділеними ядрами, придатними для оцінювання FISH-сигналів. Наявність пухлинних клітин у зразку підтверджують супровідними результатами досліджень. |
| Критерії оцінки | Зразок вважається позитивним, якщо відсоток ядер із розщепленими (Break-Apart) зеленим та червоним сигналами перевищує аналітичний поріг (зазвичай >10% від загальної кількості підрахованих ядер). |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: оцінка морфології ядер та відсутності значних інгібувальних артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: оцінка сигналів у непухлинних клітинах строми/судин (нормальний злитий жовтий сигнал або зближені червоний і зелений сигнали слугують контролем ефективності гібридизації).
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим генетиком із відповідною спеціалізацією.
6. Суміжні тести та пакети
- Діагностична ІГХ 3 категорії складності (визначення органного походження метастазів карцином невизначеного походження (в будь-який орган), пухлини голови та шиї, легень, нирок, наднирників, печінки, підшлункової залози, утворення очеревини та середостіння, головного та спинного мозку; аденоми гіпофіза; визначення гістологічного типу недиференційованих злоякісних пухлин, лімфо- та мієлопроліферативної патології (лімфаденопатії, лімфоми Ходжкіна та неходжкінські, лімфоми шкіри, плазмоклітинні пухлини, мастоцитози, гістіоцитози, мієлопроліферативні захворювання), пухлини кісток, м’яких тканин (включаючи саркоми будь-яких органів, гастроінтестинальні стромальні пухлини, філоїдні пухлини грудної залози).
- Транслокація t(14;18) BCL2 (ba probe) (FISH).
- Транслокація MYC (FISH).
7. Для лікаря: корисні ресурси
- Alaggio R. et al. The 5th edition of the World Health Organization Classification of Haematolymphoid Tumours: Lymphoid Neoplasms. Leukemia. 2022;36:1720–1748 — класифікація В-клітинних лімфом і значення поєднаних перебудов MYC, BCL2 та BCL6.
- Campo E. et al. The International Consensus Classification of Mature Lymphoid Neoplasms: a report from the Clinical Advisory Committee. Blood. 2022;140:1229–1253 — критерії класифікації зрілих лімфоїдних новоутворень.
- Large B-cell lymphoma: EHA Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment, and follow-up. HemaSphere. 2025;9 — рекомендації щодо діагностики та лікування великоклітинних В-клітинних лімфом.