Транслокація ROS1 (FISH)
Транслокація PDGFRB (FISH) — це молекулярно-цитогенетичне дослідження методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), призначене для виявлення хромосомних перебудов (транслокацій/розривів) у локусі гена PDGFRB (5q32).
Ген PDGFRB кодує бета-рецептор тромбоцитарного фактора росту (Platelet-Derived Growth Factor Receptor Beta). Транслокації за участю PDGFRB (найчастіше t(5;12)(q32;p13.2) з утворенням химерного гена ETV6-PDGFRB) призводять до постійної, ліганд-незалежної активації тирозинкінази. Це є ключовим онкогенним драйвером розвитку хронічних мієлопроліферативних новоутворень із хронічною еозинофілією. Виявлення транслокації PDGFRB має вирішальне значення, оскільки такі пацієнти демонструють надзвичайно високу чутливість до таргетної терапії інгібіторами тирозинкіназ (зокрема іматинібом).
Клінічні показання до проведення дослідження
Молекулярно-цитогенетичний аналіз транслокації гена PDGFRB призначається гематологом, онкологом або патоморфологом у таких випадках:
- Диференційна діагностика мієлоїдних та лімфоїдних новоутворень, що супроводжуються стійкою еозинофілією (згідно з класифікацією ВООЗ).
- Підозра на хронічну мієломоноцитарну лейкемію (ХММЛ) або атипову хронічну мієлоїдну лейкемію з еозинофілією та наявністю транслокації t(5;12).
- Диференційна діагностика гіпереозинофільного синдрому (ГЕС) та хронічної еозинофільної лейкемії (ХЕЛ).
- Оцінка показань до призначення таргетної терапії іматинібу мезилатом у пацієнтів із мієлопроліферативними захворюваннями або вираженою еозинофілією.
Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Зафіксована у формаліні та залита в парафін тканина пухлини (FFPE-блок), отримана під час біопсії (бронхоскопія, трансторакальна біопсія) або хірургічного видалення пухлини. |
| Обов'язковий супровід | Разом із блоком обов'язково надається 1 контрольне гістологічне скло (H&E) або замовляється його виготовлення у лабораторії для оцінки вмісту та локалізації пухлинних клітин. |
| Вимоги до тканини | Вміст пухлинних клітин у зрізі повинен становити 50-100 шт. Наявність вираженого некротичного компонента знижує інформативність аналізу. |
| Транспортування | Доставка здійснюється при кімнатній температурі (+15…+25 °C) у захисному контейнері. Уникати нагрівання вище +30 °C (призводить до плавлення парафіну). Контейнер має бути щільно закритий та чітко маркований (ПІБ пацієнта, дата народження, анатомічний тип матеріалу). |
Критерії відбракування зразка
Зразок матеріалу може бути відхилено або оцінено як неінформативний через:
- наявність згустків крові або гемолізу у пробірці з ЕДТА;
- забір біоматеріалу у пробірку з гепарином (інгібує ферментативні реакції та погіршує гібридизацію);
- перевищення допустимих термінів доставки (понад 48 годин для гематологічних зразків без фіксації).
Клінічні обмеження
Метод FISH із Break-Apart-зондом встановлює факт розриву/перебудови в локусі PDGFRB (5q32), проте не визначає конкретного гена-партнера злиття (наприклад, ETV6, HIP1, NIPBL тощо). Оскільки більшість химерних білків із залученням PDGFRB є чутливими до іматинібу, визначення конкретного партнера зазвичай не змінює лікувальної тактики.
Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтесь послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для Вашого клінічного випадку. |
| 2 | Оформлення замовлення У бланку обов'язково зазначаються гістологічний тип пухлини, дата проведення маніпуляції та дані попередніх ІГХ або молекулярних досліджень (за наявності). |
| 3 | Отримання біоматеріалу Пацієнт або його представник отримує заархівований парафіновий блок (FFPE) та контрольне скло (H&E) у патологоанатомічному відділенні клініки, де виконувалася біопсія чи операція. |
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер із парафіновим блоком, склом та заповненим направленням (разом із копією первинного патоморфологічного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус гена: транслокація гена PDGFRB виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер серед проаналізованих клітин.
Отримані дані інтерпретуються лікуючим лікарем у контексті клінічної картини.
Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) на парафінових зрізах із використанням специфічних ДНК-зондів типу Break-Apart (двоколірних розділених зондів, які працюють за принципом маркування протилежних боків від можливої точки розриву різними флуорохромами). |
| Аналітична процедура | Включає депарафінізацію зрізів, ферментативну протеолізну обробку, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
| Попередній контроль | Обов'язкове картування (маркування) пухлинної зони на контрольному склі H&E лікарем-патоморфологом перед проведенням гібридизації. |
| Критерії оцінки | Зразок вважається позитивним, якщо відсоток ядер із розщепленими (Break-Apart) або поодинокими 3'-сигналами перевищує встановалений аналітичний поріг (зазвичай >10-15%). |
Контроль якості
- Преаналітичний контроль: оцінка життєздатності клітин та достатності ядерного матеріалу в зразку.
- Внутрішній контроль: оцінка нормального злитого/подвійного сигналу у морфологічно нормальних клітинах зразка.
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
Суміжні тести та пакети
Для лікаря: корисні ресурси
- WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues: Myeloid/lymphoid neoplasms with eosinophilia and rearrangement of PDGFRA, PDGFRB, or FGFR1, or with PCM1-JAK2.
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Myeloproliferative Neoplasms — міжнародні рекомендації щодо діагностичного пошуку та призначення іматинібу при PDGFRB-позитивних станах.
- ELN (European LeukemiaNet) recommendations for the management of eosinophilia — європейські рекомендації з діагностики та ведення пацієнтів із гіпереозинофілією та еозинофільними лейкеміями.