Транслокація PDGFRB (FISH)
Транслокація PDGFRB (FISH) — це молекулярно-цитогенетичне дослідження методом флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), призначене для виявлення хромосомних перебудов (транслокацій/розривів) у локусі гена PDGFRB (5q32).
Ген PDGFRB кодує бета-рецептор тромбоцитарного фактора росту (Platelet-Derived Growth Factor Receptor Beta). Транслокації за участю PDGFRB (найчастіше t(5;12)(q32;p13.2) з утворенням химерного гена ETV6-PDGFRB) призводять до постійної, ліганд-незалежної активації тирозинкінази. Це є ключовим онкогенним драйвером розвитку хронічних мієлопроліферативних новоутворень із хронічною еозинофілією. Виявлення транслокації PDGFRB має вирішальне значення, оскільки такі пацієнти демонструють надзвичайно високу чутливість до таргетної терапії інгібіторами тирозинкіназ (зокрема іматинібом).
Клінічні показання до проведення дослідження
Молекулярно-цитогенетичний аналіз транслокації гена PDGFRB призначається гематологом, онкологом або патоморфологом у таких випадках:
- Диференційна діагностика мієлоїдних та лімфоїдних новоутворень, що супроводжуються стійкою еозинофілією (згідно з класифікацією ВООЗ).
- Підозра на хронічну мієломоноцитарну лейкемію (ХММЛ) або атипову хронічну мієлоїдну лейкемію з еозинофілією та наявністю транслокації t(5;12).
- Диференційна діагностика гіпереозинофільного синдрому (ГЕС) та хронічної еозинофільної лейкемії (ХЕЛ).
- Оцінка показань до призначення таргетної терапії іматинібу мезилатом у пацієнтів із мієлопроліферативними захворюваннями або вираженою еозинофілією.
Матеріал і вимоги до зразка
| Гематологічний матеріал (основний) | Аспірат кісткового мозку (1.5-2.0 мл) або венозна кров (3-5 мл) у вакутейнері з коагулянтом К2/К3-ЕДТА (фіолетова кришка). Не використовувати гепарин! |
| Умови зберігання та доставки (кров/кістковий мозок) | Зберігати та транспортувати при температурі +2…+8 °C. Матеріал має бути доставлений у лабораторію протягом 24-48 годин після забору. |
Критерії відбракування зразка
Зразок матеріалу може бути відхилено або оцінено як неінформативний через:
- наявність згустків крові або гемолізу у пробірці з ЕДТА;
- забір біоматеріалу у пробірку з гепарином (інгібує ферментативні реакції та погіршує гібридизацію);
- перевищення допустимих термінів доставки (понад 48 годин для гематологічних зразків без фіксації).
Клінічні обмеження
Метод FISH із Break-Apart-зондом встановлює факт розриву/перебудови в локусі PDGFRB (5q32), проте не визначає конкретного гена-партнера злиття (наприклад, ETV6, HIP1, NIPBL тощо). Оскільки більшість химерних білків із залученням PDGFRB є чутливими до іматинібу, визначення конкретного партнера зазвичай не змінює лікувальної тактики.
Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтесь послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для Вашого клінічного випадку. |
| 2 | Оформлення замовлення У бланку вказуються попередній діагноз, показники гемограми (рівень еозинофілів, моноцитів) або дані патоморфологічного дослідження. |
| 3 | Забір або отримання біоматеріалу Для гематологічних патологій: здійснюється пункція кісткового мозку або забір венозної крові у процедурному кабінеті/гематологічному стаціонарі. |
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Пробірка з біоматеріалом (у спеціальному хладоелементі) передається до лабораторного офісу чи надсилається кур'єрською службою. |
Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус гена: транслокація гена PDGFRB виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер серед проаналізованих клітин.
Отримані дані інтерпретуються лікуючим лікарем у контексті клінічної картини.
Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) на інтерфазних ядрах (суспензії клітин кісткового мозку/крові) із використанням ДНК-зондів типу Break-Apart для гена PDGFRB (локус 5q32). |
| Аналітична процедура | Фіксація гематологічних препаратів, ферментативна протеолізна обробка, ко-денатурація ДНК-зонда та ДНК мішені, гібридизація та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами |
| Оцінка | Підрахунок сигналів проводиться у 100-200 інтерфазних ядрах під флуоресцентним мікроскопом. |
| Критерії позитивності | Перевищення розрахункового порогу аберантних ядер із відокремленням 5'- та 3'-сигналів (понад 10% для інтерфазного FISH). |
Контроль якості
- Преаналітичний контроль: оцінка життєздатності клітин та достатності ядерного матеріалу в зразку.
- Внутрішній контроль: оцінка нормального злитого/подвійного сигналу у морфологічно нормальних клітинах зразка.
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
Суміжні тести та пакети
Для лікаря: корисні ресурси
- WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues: Myeloid/lymphoid neoplasms with eosinophilia and rearrangement of PDGFRA, PDGFRB, or FGFR1, or with PCM1-JAK2.
- NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Myeloproliferative Neoplasms — міжнародні рекомендації щодо діагностичного пошуку та призначення іматинібу при PDGFRB-позитивних станах.
- ELN (European LeukemiaNet) recommendations for the management of eosinophilia — європейські рекомендації з діагностики та ведення пацієнтів із гіпереозинофілією та еозинофільними лейкеміями.