Філадельфійська хромосома" t (9;22) (q34.1;q11.2) BCR::ABL1 (FISH)
Злиття генів BCR::ABL1 — це генетична перебудова, яка зазвичай виникає внаслідок реципрокної транслокації t(9;22)(q34;q11.2) між геном BCR, розташованим у локусі 22q11.23, та геном ABL1 (9q34.12). Унаслідок цієї перебудови утворюється філадельфійська хромосома (Ph) та формується злитий ген BCR::ABL1, експресія якого призводить до утворення білка з постійно активною тирозинкіназною активністю, що стимулює неконтрольоване розмноження клітин.
Перебудова BCR::ABL1 є характерною генетичною ознакою хронічної мієлоїдної лейкемії та також може виявлятися при гострій лімфобластній лейкемії й окремих випадках гострої мієлоїдної лейкемії. Виявлення цієї перебудови має важливе діагностичне та терапевтичне значення, оскільки BCR::ABL1 є мішенню для терапії інгібіторами тирозинкінази.
Отриманий результат слід інтерпретувати в сукупності з морфологічними, імунофенотиповими та клінічними даними.
1. Клінічні показання до проведення дослідження
Дослідження призначає гематолог у таких випадках:
- Підозра на хронічну мієлоїдну лейкемію (ХМЛ) — для виявлення її визначального генетичного маркера.
- Діагностика В-лімфобластної лейкемії/лімфоми — для встановлення підтипу з BCR::ABL1.
- Обстеження при гострій лейкемії змішаного фенотипу — для уточнення генетичного підтипу.
- Уточнення результатів каріотипування, зокрема за підозри на варіантну транслокацію або приховане злиття BCR::ABL1.
- Неінформативне цитогенетичне дослідження або розбіжності між результатами різних методів — як додатковий спосіб перевірки генетичного статусу.
Наявність BCR::ABL1 сама по собі не визначає конкретний тип лейкемії. Результат інтерпретують разом із клінічними даними, морфологією клітин та імунофенотипуванням.
2. Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | Для FISH-дослідження BCR::ABL1 використовують клітини периферичної крові або кісткового мозку. Вибір матеріалу залежить від клінічної ситуації.
При гострій лейкемії придатність периферичної крові залежить від наявності в ній достатньої кількості патологічних клітин. |
| Основні вимоги |
Кількість придатних ядер, необхідних для аналізу, визначають за валідованою методикою для відповідного типу матеріалу. Остаточну придатність зразка оцінює лабораторія. |
| Транспортування | Периферичну кров та аспірат кісткового мозку транспортують у герметично закритих, промаркованих пробірках при температурі +2…+8 °C, у захисному пакуванні, яке запобігає пошкодженню пробірок і витіканню матеріалу. Не заморожувати та не перегрівати. Матеріал доставляють до лабораторії якомога швидше після забору. На пробірці зазначають ПІБ і дату народження пацієнта та тип матеріалу; у направленні — дату й час забору. Максимально допустимий строк доставки визначається чинними правилами приймання лабораторії для відповідного типу матеріалу. |
Критерії відбракування зразка
Недостатня кількість придатних клітин, пошкодження ядер або незадовільна якість гібридизації. Неінтерпретований результат не можна прирівнювати до висновку «перебудову не виявлено».
3. Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтеся послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для вашого клінічного випадку. |
| 2 | Супровідні дані Попередній або встановлений діагноз, мета дослідження, тип і дата забору матеріалу, відомості про лікування. Бажано додати результати загального аналізу крові, морфологічного дослідження, проточної цитометрії, каріотипування та попередніх тестів на BCR::ABL1. |
| 3 | Отримання біоматеріалу Процедура та місце забору повністю залежать від типу матеріалу:
|
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер з аспіратом та заповненим направленням (разом із копією первинного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
4. Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус локусу: злиття BCR::ABL1 виявлено або не виявлено, а також наводять кількість та/або частку ядер з аберантним патерном сигналів серед усіх проаналізованих ядер.
Для зондів BCR/ABL1 Dual Fusion класичний позитивний патерн — два злиті жовті сигнали, один окремий червоний та один окремий зелений сигнал (2F1R1G), що свідчить про перебудову BCR::ABL1.
Типовий нормальний патерн у диплоїдному ядрі без перебудови — два окремі червоні та два окремі зелені сигнали (2R2G). Нетипові комбінації сигналів оцінюють відповідно до валідованої лабораторної методики.
Якщо злиття виявлено: результат підтверджує наявність генетичної мішені для інгібіторів тирозинкіназ. При ХМЛ ці препарати становлять основу лікування; при BCR::ABL1-позитивній гострій лімфобластній лейкемії їх застосовують у складі відповідного протоколу. Конкретний препарат і схему визначає гематолог.
Якщо злиття не виявлено: у дослідженому зразку не встановлено змін, які визначає використана система зондів. Результат не виключає інших гематологічних захворювань. За переконливої клінічної підозри або розбіжностей між тестами лікар визначає потребу в додатковій перевірці.
Для контролю лікування FISH і ПЛР не є взаємозамінними. FISH визначає частку клітин із генним злиттям, а кількісна ПЛР зі зворотною транскрипцією (RT-qPCR) вимірює рівень відповідного РНК-транскрипту. Відсоток змінених ядер за FISH не можна прирівнювати до показника BCR::ABL1 за міжнародною шкалою (IS).
5. Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | FISH виконують із використанням флуоресцентно мічених ДНК-зондів до ділянок генів BCR та ABL1. Для виявлення злиття застосовують системи зондів типу dual-fusion: характерне поєднання сигналів свідчить про зближення відповідних генних ділянок унаслідок перебудови. Оцінювання враховує збереження ядер, якість і розташування сигналів, кількість придатних для аналізу клітин та валідований лабораторний поріг для конкретної системи зондів і матеріалу. |
| Обмеження методу |
|
| Аналітична процедура | Включає фіксацію та підготовку препарату, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК-мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: оцінка морфології ядер та відсутності значних інгібувальних артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: наявність чітких сигналів від ділянок генів BCR та ABL1 підтверджує успішність гібридизації. Додатково оцінюють інтенсивність сигналів, рівень фонової флуоресценції та збереженість ядер. Типовий нормальний патерн у диплоїдному ядрі без перебудови — два окремі червоні та два окремі зелені сигнали.
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим лікарем-цитогенетиком із відповідною спеціалізацією.
6. Суміжні тести та пакети
- Цитогенетичне дослідження при онкогематологічних захворюваннях (каріотипування)
- Дослідження препаратів кісткового мозку та крові на гемобластози
- BCR-ABL1 p210 (mbcr) (Філадельфійська хромосома, кількісне визначення, РНК, ПЛР)
- Діагностика лімфопроліферативних захворювань (цитоморфологічне дослідження, імунофенотип)