ПЛР. Бактеріальні гострі кишкові інфекції (Aeromonas spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Salmonella spp., Vibrio spp., Clostridium difficile toxin B, Yersinia enterocolitica), якісне визначення видів (кал)

1. Чи підходить мені цей аналіз?

ПЛР-дослідження рекомендоване пацієнтам із симптомами гострої кишкової інфекції, коли необхідно швидко визначити бактеріального збудника захворювання.

Аналіз може бути доцільним при:

•    гострій діареї;
•    діареї з кров'ю або слизом;
•    підвищенні температури;
•    болю та спазмах у животі;
•    нудоті або блюванні;
•    підозрі на харчове отруєння;
•    поверненні з подорожей;
•    групових випадках кишкових інфекцій;
•    діареї після прийому антибіотиків;
•    тривалій діареї незрозумілого походження;
•    тяжкому перебігу гастроентериту;
•    обстеженні дітей, літніх людей та пацієнтів зі зниженим імунітетом. 

2. Що показує аналіз?

Дослідження дозволяє одночасно визначити ДНК найпоширеніших бактеріальних збудників гострих кишкових інфекцій методом ПЛР.

Панель включає:

•    Aeromonas spp.  
•    Shigella spp.  
•    Campylobacter spp.  
•    Salmonella spp.  
•    Vibrio spp.  
•    Yersinia enterocolitica  
•    Clostridioides difficile toxin B  

Метод визначає генетичний матеріал бактерій навіть за невеликої кількості збудника у зразку, що дозволяє отримати результат значно швидше порівняно з класичним бактеріологічним посівом. Також на відміну від бактеріологічного посіву, метод не потребує вирощування бактерій на поживних середовищах, тому для частини бактерій, які є надзвичайно вибагливими до умов культивування. 

3. Як проводиться дослідження?

Після надходження зразка до лабораторії проводиться кілька етапів дослідження.

1. Підготовка зразка

Із калу виділяють генетичний матеріал (ДНК) можливих бактеріальних збудників.

2. Ампліфікація ДНК

За допомогою методу Real-Time PCR відбувається багаторазове копіювання специфічних ділянок ДНК бактерій.

Завдяки цьому метод дозволяє виявити навіть мінімальну кількість збудника.

3. Аналіз результатів

Сучасне програмне забезпечення аналізує отримані сигнали та визначає, чи присутня ДНК кожного із бактеріальних патогенів, що входять до панелі.

Дослідження виконується на ампліфікаторі Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR System, який забезпечує високу аналітичну чутливість, специфічність та відтворюваність результатів.

4. Як підготуватися до здачі аналізу

Правильна підготовка допомагає отримати максимально достовірний результат.

Рекомендується:

•    здавати матеріал до початку антибактеріальної терапії;  
•    якщо лікування вже проводиться – за можливості виконати дослідження після його завершення або відповідно до рекомендацій лікаря;  
•    не використовувати проносні препарати перед збором матеріалу без медичних показань;  
•    не застосовувати ректальні свічки або клізми напередодні дослідження.

5. Як правильно забрати зразок біологічного матеріалу?

Для дослідження використовують свіжий кал.

Рекомендації:

•    провести природну дефекацію;  
•    уникати потрапляння сечі, води, менструальної крові;  
•    стерильною ложечкою відібрати приблизно 10–20 г матеріалу;  
•    помістити його у стерильний контейнер;  
•    щільно закрити кришку.  

Як транспортувати матеріал?

Матеріал бажано доставити до лабораторії якнайшвидше.

Якщо це неможливо:

•    допускається зберігання при температурі +2…+8 °C;  
•    не рекомендується заморожувати зразок, якщо цього не передбачає лабораторія.  

Чого не можна робити?

Не рекомендується:

•    збирати кал із унітаза;  
•    використовувати нестерильний ємності;  
•    допускати потрапляння сечі;  
•    використовувати матеріал із підгузка або пелюшки;  
•    торкатися внутрішньої поверхні контейнера руками;  
•    порушувати умови транспортування.  

Недотримання цих рекомендацій може вплинути на якість дослідження.

 6. Як виглядає результат?

У висновку буде зазначено перелік усіх бактерій, що входять до панелі.

Навпроти кожного збудника буде один із варіантів відповіді:

•    Не виявлено
•    Виявлено

Приклад:

7. Як інтерпретувати результат?

Результат «не виявлено»

ДНК досліджуваного бактеріального збудника у зразку не виявлено.

Це може означати:

•    відсутність саме цієї бактеріальної інфекції;  
•    неправильний час або метод забору матеріалу;  
•    наявність іншого бактеріального збудника, який не входить до панелі;
•    вірусну, паразитарну або неінфекційну причину захворювання.

Результат «ВИЯВЛЕНО»

Позитивний результат означає, що у зразку калу виявлено ДНК відповідного бактеріального збудника.

Це свідчить про наявність генетичного матеріалу бактерії, однак остаточний висновок щодо діагнозу робить лікар з урахуванням:

Результат необхідно оцінювати разом із:

•    клінічної картини;
•    тривалості симптомів;
•    епідеміологічного анамнезу;
•    результатів інших лабораторних досліджень.

Дослідження входить в сферу акредитації ISO15189 та ISO9001 – стандартів, що визначають вимоги до якості та компетентності медичних лабораторій, а також систем управління якістю. 

8. Обмеження аналізу

На результат можуть впливати:

•    прийом антибактеріальних препаратів;  
•    неправильний збір матеріалу;  
•    недостатня кількість біологічного матеріалу;  
•    порушення умов транспортування;  
•    дуже ранній або пізній етап захворювання.  

ПЛР визначає генетичний матеріал бактерій, але не дозволяє:

•    встановити їхню життєздатність;  
•    оцінити кількість бактерій;  
•    визначити чутливість до антибіотиків.  

Саме тому у певних клінічних ситуаціях лікар може рекомендувати додаткові дослідження.

9. Що робити після отримання результату?

Не рекомендується самостійно розпочинати лікування антимікробними препаратами лише на підставі лабораторного висновку.

Лікар оцінює:

•    клінічні симптоми;  
•    тривалість захворювання;  
•    результати ПЛР;  
•    епідеміологічний анамнез;  
•    інші лабораторні дослідження.  

Якщо ПЛР підтверджує бактеріальну інфекцію, лікар визначає необхідність лікування та, за потреби, може призначити бактеріологічний посів із визначенням чутливості до антибіотиків.

Якщо результат негативний, але симптоми зберігаються, можуть бути рекомендовані додаткові дослідження, зокрема ПЛР-панель на вірусні кишкові інфекції або паразитологічні дослідження.

FAQ

Чим ПЛР відрізняється від бакпосіву?

ПЛР швидко визначає ДНК бактерій і дозволяє встановити можливого збудника вже протягом 2 робочих днів. Бактеріологічний посів потребує більше часу, але дає можливість визначити чутливість бактерій до антибіотиків.

Чи потрібно припиняти прийом антибіотиків?

За можливості матеріал слід збирати до початку лікування. Якщо це неможливо, повідомте лікаря або працівника лабораторії про прийом препаратів.

Чи може аналіз виявити декілька бактерій одночасно?

Так. Панель дозволяє одночасно визначити сім найпоширеніших бактеріальних збудників гострих кишкових інфекцій.

Чи означає позитивний результат, що мені обов'язково потрібен антибіотик?

Не завжди. Не всі бактеріальні кишкові інфекції потребують антибактеріальної терапії. Рішення про лікування приймає лікар з урахуванням симптомів, тяжкості захворювання, віку пацієнта та супутніх факторів.

Якщо ПЛР негативна, чи означає це, що інфекції немає?

Ні. Негативний результат означає, що не виявлено ДНК саме тих бактерій, які входять до панелі. Причиною симптомів можуть бути віруси, паразити, інші бактерії або неінфекційні захворювання.

Чи потрібно здавати бакпосів після ПЛР?

У більшості випадків ПЛР достатньо для швидкого встановлення ймовірного збудника. Однак якщо необхідно визначити чутливість бактерії до антибіотиків або провести додаткові мікробіологічні дослідження, лікар може призначити бактеріологічний посів. 

Які бактерії найчастіше викликають симптоми, схожі між собою? 

Які додаткові дослідження, які можуть бути рекомендовані?

Залежно від клінічної ситуації лікар може рекомендувати:

•    ПЛР. Вірусні гострі кишкові інфекції (P202) – якщо бактеріальна панель негативна, але симптоми зберігаються.  
•    Виявлення носійства збудників кишкових інфекцій+ДДМ (A036) – для визначення чутливості до антибіотиків.  
•    Паразитологічне дослідження калу (S235) – якщо є підозра на паразитарну інфекцію.  
•    Загальний аналіз крові (B257), С-реактивний білок (B205) та електроліти (K089) – для оцінки тяжкості запального процесу та ступеня зневоднення.