Транслокація t(8;21)(q22;q22) RUNX1::RUNX1T1 (AML1::ETO) (FISH)
Транслокація t(8;21) — це хромосомна перебудова за участю гена RUNX1T1, що розташовується у локусі 8q21.3, та гена RUNX1 (21q22.12), які беруть участь у регуляції кровотворення. Унаслідок цієї перебудови утворюється злитий ген RUNX1::RUNX1T1 (історична назва AML1::ETO), продукт якого порушує нормальну регуляцію диференціювання мієлоїдних клітин і сприяє розвитку лейкемії.
Транслокація t(8;21) є характерною генетичною ознакою окремого підтипу гострої мієлоїдної лейкемії (ГМЛ) і має важливе діагностичне та прогностичне значення.
Отриманий результат слід інтерпретувати в сукупності з морфологічними, імунофенотиповими та іншими генетичними даними.
1. Клінічні показання до проведення дослідження
- Первинна діагностика ГМЛ: виявлення RUNX1::RUNX1T1 у складі цитогенетичного обстеження.
- Підозра на ГМЛ із перебудовою RUNX1::RUNX1T1: за відповідних морфологічних та імунофенотипових ознак.
- Уточнення цитогенетичного результату: підтвердження злиття за підозри на t(8;21), складну або приховану перебудову.
- Недостатньо інформативне каріотипування: якщо не отримано придатних метафаз або якість хромосом не дозволяє зробити достовірний висновок.
- Визначення генетичної групи ризику: як частина комплексного оцінювання вперше діагностованої ГМЛ.
Для подальшого моніторингу вимірюваної залишкової хвороби (MRD) перевагу надають кількісній ПЛР зі зворотною транскрипцією на RUNX1::RUNX1T1, а не FISH.
2. Матеріал і вимоги до зразка
| Тип біоматеріалу | У стандартному діагностичному алгоритмі перевагу надають аспірату кісткового мозку. Периферичну кров можна використовувати за наявності достатньої кількості циркулюючих патологічних клітин. |
| Основні вимоги |
Кількість придатних ядер, необхідних для аналізу, визначають за валідованою методикою для відповідного типу матеріалу. Остаточну придатність зразка оцінює лабораторія. |
| Транспортування | Аспірат кісткового мозку та периферичну кров транспортують у герметично закритих, промаркованих пробірках з антикоагулянтом ЕДТА, у захисному пакуванні, яке запобігає пошкодженню пробірок і витіканню матеріалу. На кожній пробірці зазначають ПІБ і дату народження пацієнта та тип матеріалу — «аспірат кісткового мозку» або «периферична кров». У направленні вказують дату й час забору. |
Критерії відбракування зразка
Недостатня кількість придатних клітин, пошкодження ядер або незадовільна якість гібридизації. Неінтерпретований результат не можна прирівнювати до висновку «перебудову не виявлено».
Клінічні обмеження
Дослідження спрямоване на конкретне злиття RUNX1::RUNX1T1. Воно не визначає всі можливі перебудови чи мутації RUNX1 і не замінює комплексного генетичного обстеження. Відсутність цього злиття не виключає ГМЛ.
3. Як замовити дослідження
| 1 | Консультація Скористайтеся послугою Медико-генетичного консультування — лікар-генетик CSD LAB допоможе підібрати оптимальний тест саме для вашого клінічного випадку. |
| 2. | Супровідні дані Направлення, попередній діагноз, результати морфології крові та кісткового мозку, проточної цитометрії, каріотипування й попередніх молекулярних досліджень. Необхідно зазначити, чи вже розпочато лікування. |
| 3 | Отримання біоматеріалу Процедура та місце забору повністю залежать від типу матеріалу:
|
| 4 | Передача матеріалу до лабораторії Контейнер з аспіратом та заповненим направленням (разом із копією первинного висновку) передається до будь-якого лабораторного офісу або відправляється спеціалізованою логістичною службою. |
4. Результат і вплив на лікування
Результат надається у вигляді структурованого молекулярно-цитогенетичного звіту. У висновку зазначається підсумковий статус: злиття RUNX1::RUNX1T1, характерне для транслокації t(8;21), виявлено або не виявлено, а також наводиться кількість аберантних ядер (класичний позитивний патерн для зондів типу Dual Fusion — два злиті жовті сигнали, один окремий червоний та один окремий зелений сигнал) серед проаналізованих пухлинних клітин.
Виявлення RUNX1::RUNX1T1 у відповідному клініко-морфологічному контексті дозволяє визначити ГМЛ із цим злиттям, що належить до групи CBF-ГМЛ.
За класифікацією ELN 2022, розробленою насамперед для дорослих пацієнтів, які отримують інтенсивне лікування, RUNX1::RUNX1T1 належить до сприятливої групи генетичного ризику. Це характеристика групи пацієнтів, а не гарантія індивідуального результату лікування. Супутні мутації KIT та/або FLT3 самі по собі не змінюють цю початкову категорію за ELN 2022.
Подальшу лікувальну тактику визначають з урахуванням стану пацієнта, відповіді на терапію та динаміки MRD. Недостатнє зниження або подальше зростання рівня транскрипту RUNX1::RUNX1T1 може мати значення для оцінювання ризику рецидиву й подальших клінічних рішень.
Відсутність перебудови за FISH потребує зіставлення з іншими даними. За збереження підозри на цей підтип ГМЛ доцільне додаткове молекулярне дослідження.
5. Методологія та контроль якості (QC)
| Методологія | Флуоресцентна гібридизація in situ (FISH) із використанням специфічних ДНК-зондів, які зв’язуються з ділянками RUNX1 та RUNX1T1. Для визначення цієї транслокації застосовують зонди типу Dual-Fusion, які позначають ділянки обох генів різними флуоресцентними мітками. Формування характерних сигналів злиття свідчить про їх зближення внаслідок перебудови. |
| Аналітична процедура | Включає фіксацію та підготовку препарату, ко-денатурацію ДНК-зонда та ДНК-мішені, гібридизацію та оцінку сигналів під флуоресцентним мікроскопом з відповідними світлофільтрами. |
| Критерії оцінки | Результат визначають за характером сигналів і часткою ядер з аберантним патерном відповідно до валідованого лабораторного порогу для використаного набору зондів RUNX1::RUNX1T1. При прикордонних або нетипових результатах може знадобитися оцінка додаткових клітин чи уточнювальне дослідження. Для дослідження використовують ДНК-зонди типу Dual Fusion, які дозволяють виявити злиття генів RUNX1 та RUNX1T1, характерне для транслокації t(8;21). Дослідження не призначене для виявлення всіх інших можливих перебудов цих генів або точкових мутацій. FISH визначає перебудову на рівні ДНК. Частка ядер із перебудовою не є еквівалентом рівня транскрипту за RT-qPCR і не замінює молекулярного моніторингу MRD. |
Контроль якості
- Преаналітичний переконтроль: оцінка морфології ядер та відсутності значних інгібувальних артефактів фіксації.
- Внутрішній контроль: оцінка сигналів у резидуальних непухлинних клітинах гемопоезу (для зондів RUNX1/RUNX1T1 Dual Fusion типовий нормальний патерн у диплоїдному ядрі — два окремі червоні та два окремі зелені сигнали). Якість гібридизації оцінюють за чіткістю та інтенсивністю сигналів, рівнем фонової флуоресценції й відповідністю контрольних клітин очікуваному патерну.
- Експертна верифікація: підрахунок сигналів та остаточна інтерпретація результату виконуються кваліфікованим генетиком із відповідною спеціалізацією.
6. Суміжні тести та пакети
- Цитогенетичне дослідження при онкогематологічних захворюваннях (каріотипування)
- Дослідження препаратів кісткового мозку та крові на гемобластози
- Діагностика гострих лейкозів (цитоморфологічне дослідження, імунофенотип)
- FLT3 (D835Y, кров, ПЛР)
7. Для лікаря: корисні ресурси
- ELN Recommendations for AML, 2022 — діагностика ГМЛ, генетична стратифікація ризику та лікувальні підходи.
- ELN-DAVID: 2025 Update on MRD in AML — рекомендації щодо оцінювання та моніторингу залишкової хвороби.
- Mayo Clinic Laboratories: RUNX1::RUNX1T1 Quantitative Testing — застосування кількісної ПЛР при діагностиці та спостереженні.